(فلوسیتومتری، FCM) یک آنالایزر سلولی است که شدت فلورسانس نشانگرهای سلولی رنگ‌آمیزی را اندازه‌گیری می‌کند.این یک فناوری پیشرفته است که بر اساس تجزیه و تحلیل و مرتب‌سازی سلول‌های منفرد توسعه یافته است.این می تواند به سرعت اندازه، ساختار داخلی، DNA، RNA، پروتئین ها، آنتی ژن ها و سایر خواص فیزیکی یا شیمیایی سلول ها را اندازه گیری و طبقه بندی کند و می تواند بر اساس مجموعه ای از این طبقه بندی ها باشد.
فلوسایتومتر عمدتاً از پنج بخش زیر تشکیل شده است:
1 محفظه جریان و سیستم سیال
2 منبع نور لیزر و سیستم شکل دهی پرتو
3 سیستم نوری
4 الکترونیک، ذخیره سازی، نمایش و سیستم تجزیه و تحلیل
5 سیستم مرتب سازی سلولی
در میان آنها، تحریک لیزر در منبع نور لیزر و سیستم تشکیل پرتو، اندازه‌گیری اصلی سیگنال‌های فلورسانس در فلوسیتومتری است.شدت نور تحریک و زمان نوردهی با شدت سیگنال فلورسانس مرتبط است.لیزر منبع نور منسجمی است که می تواند نور تک طول موج، با شدت بالا و پایداری بالا را ارائه دهد.این منبع نور تحریک ایده آل برای برآورده کردن این الزامات است.
دو عدسی استوانه ای بین منبع لیزر و محفظه جریان وجود دارد.این لنزها یک پرتو لیزر با مقطع دایره‌ای ساطع شده از منبع لیزر را به یک پرتو بیضوی با سطح مقطع کوچکتر (22 میکرومتر × 66 میکرومتر) متمرکز می‌کنند.انرژی لیزر درون این پرتو بیضوی بر اساس توزیع نرمال توزیع می‌شود و از شدت روشنایی ثابت برای سلول‌هایی که از ناحیه تشخیص لیزر عبور می‌کنند، اطمینان حاصل می‌کند.از سوی دیگر، سیستم نوری شامل مجموعه‌های متعددی از لنزها، سوراخ‌ها و فیلترها است که می‌توان آنها را تقریباً به دو گروه بالادست و پایین دست محفظه جریان تقسیم کرد.
سیستم نوری در جلوی محفظه جریان از یک لنز و سوراخ سوزنی تشکیل شده است.وظیفه اصلی لنز و سوراخ سوزنی (معمولاً دو عدسی و یک سوراخ سوزن) این است که پرتو لیزر را با مقطع دایره ای ساطع شده از منبع لیزر به یک پرتو بیضوی با سطح مقطع کوچکتر متمرکز کند.این انرژی لیزر را بر اساس توزیع نرمال توزیع می‌کند و شدت روشنایی ثابت را برای سلول‌ها در سراسر ناحیه تشخیص لیزر تضمین می‌کند و تداخل نور سرگردان را به حداقل می‌رساند.
سه نوع فیلتر اصلی وجود دارد:
1: فیلتر گذر طولانی (LPF) - فقط به نور با طول موج بالاتر از یک مقدار خاص اجازه عبور می دهد.
2: فیلتر کوتاه گذر (SPF) - فقط به نور با طول موج کمتر از یک مقدار خاص اجازه عبور می دهد.
3: فیلتر باند گذر (BPF) - فقط به نور در یک محدوده طول موج خاص اجازه عبور می دهد.
ترکیب‌های مختلف فیلترها می‌توانند سیگنال‌های فلورسانس را در طول موج‌های مختلف به لوله‌های تکثیرکننده نوری (PMTs) هدایت کنند.به عنوان مثال، فیلترهایی برای تشخیص فلورسانس سبز (FITC) در مقابل PMT LPF550 و BPF525 هستند.فیلترهایی که برای تشخیص فلورسانس نارنجی قرمز (PE) در مقابل PMT استفاده می شوند LPF600 و BPF575 هستند.فیلترهای تشخیص فلورسانس قرمز (CY5) در جلوی PMT LPF650 و BPF675 هستند.
فلوسیتومتری عمدتاً برای مرتب سازی سلولی استفاده می شود.با پیشرفت فناوری رایانه، توسعه ایمونولوژی و اختراع فناوری آنتی بادی مونوکلونال، کاربردهای آن در زیست شناسی، پزشکی، داروسازی و سایر زمینه ها به طور فزاینده ای گسترش می یابد.این کاربردها شامل تجزیه و تحلیل دینامیک سلولی، آپوپتوز سلولی، تایپ سلولی، تشخیص تومور، تجزیه و تحلیل اثربخشی دارو و غیره می باشد.
زمان ارسال: سپتامبر 21-2023
